Espectrofotômetro UV-Vis

Um espectrofotômetro mede como uma amostra interage com a luz. Este guia se limita aos espectrofotômetros de ultravioleta-visível (UV-Vis), que normalmente medem a luz transmitida e expressam o resultado como absorbância ou transmitância em um comprimento de onda ou ao longo de um espectro. Não abrange as famílias de espectrofotômetros de infravermelho, fluorescência, absorção atômica ou outras.

Para que serve um espectrofotômetro

As medições UV-Vis são usadas com frequência para estimar concentrações, obter varreduras espectrais, acompanhar reações e realizar verificações rotineiras de qualidade quando o analito ou um reagente apropriado absorve na região medida. Em condições adequadas, a absorbância pode ser relacionada à concentração e ao caminho óptico pela relação de Beer–Lambert. A visão geral de UV-Vis da Agilent 🔗 descreve o percurso básico da medição e suas limitações comuns.

Componentes principais

Componente	Função no processo
Fonte de luz	Fornece luz ao longo da faixa de comprimentos de onda pretendida.
Seletor de comprimento de onda	Usa um monocromador ou filtro para selecionar o comprimento de onda de medição.
Suporte de amostra	Posiciona uma cubeta, microplaca, amostra sólida ou acessório.
Detector	Mede a luz transmitida ou refletida.
Sistema de dados	Converte o sinal óptico em absorbância, transmitância ou espectro.

Onde se aplica

A espectrofotometria é direta e acessível quando a amostra e a pergunta analítica são adequadas a uma medição óptica. Ela é menos seletiva quando vários componentes absorvem em comprimentos de onda semelhantes ou quando turbidez, espalhamento, transparência inadequada do solvente ou absorção fraca complicam o resultado. Nessas situações, a separação por HPLC ou LC-MS pode integrar um processo mais adequado. O guia de seleção de detectores para HPLC explica como a detecção UV em fluxo difere da medição direta em espectrofotômetro e quando pode ser necessária outra propriedade de detecção.

Contexto dos fabricantes

Em um processo UV-Vis, a adequação ao método também inclui o suporte ou acessório de amostra, o processo de dados e a abordagem do laboratório para verificação e suporte. O guia de linhas de UV-Vis organiza linhas atuais representativas da Agilent, Shimadzu, Thermo Fisher Scientific e PerkinElmer por formato de amostra e finalidade de medição. Consulte Agilent, Shimadzu e Thermo Fisher Scientific para obter o contexto dos fabricantes em diferentes categorias.

Como o suporte de amostra define o caminho óptico, Seleção de cubetas e formatos de amostra para UV-Vis aborda material, caminho óptico, volume, geometria e manuseio. Se o processo puder migrar de cubetas medidas em série para ensaios em placas, consulte Espectrofotômetro versus leitor de microplacas para comparar caminho óptico, capacidade de processamento, controles e modos de detecção.

O que considerar antes da adoção

Objetivo da medição: determine se é necessária uma leitura em comprimento de onda único, uma varredura, cinética, cálculo de concentração ou um processo baseado em placas.
Comportamento da amostra: verifique absorbância esperada, transparência do solvente, turbidez, faixa de concentração e compatibilidade química com o suporte de amostra.
Caminho óptico e recipiente: material da cubeta, caminho óptico, limpeza, orientação e volume de enchimento podem afetar o resultado.
Controles do método: brancos, materiais de referência, padrões de calibração e critérios de aceitação devem fazer parte do método, e não ser acrescentados somente após resultados incomuns.
Adequação ao processo: capacidade de processamento, controle de temperatura, acessórios, software e requisitos de relatório podem ser tão importantes quanto a faixa de comprimentos de onda.

Cuidados rotineiros, calibração e segurança

Mantenha cubetas e superfícies ópticas limpas, use um branco adequado e investigue desvios inesperados da linha de base ou mudanças nas leituras de referência. A calibração ou verificação deve ser definida pelas instruções do instrumento, pelo método e pelo sistema da qualidade do laboratório. Uma visão geral não pode estabelecer limites de aceitação para um ensaio específico.

Manuseie amostras, reagentes, vidraria e fontes de luz UV conforme os procedimentos de segurança pertinentes. No preparo de amostras analíticas, uma centrífuga pode ser usada antes da medição óptica quando o protocolo exigir clarificação ou separação de fases.

Antes da compra ou da transferência de método

Descreva o formato da amostra, os comprimentos de onda pretendidos, a capacidade de processamento, o uso de cubetas ou placas, as necessidades de temperatura e as saídas de dados exigidas. Avalie se o método precisa de um instrumento de varredura, leituras em comprimento de onda fixo, acessórios ou uma técnica mais seletiva. Não trate uma ampla faixa de comprimentos de onda como substituta de uma verificação de adequação específica do método. Use o guia de critérios de seleção de UV-Vis para converter esses requisitos em uma lista de opções.