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分光光度计与微孔板读数仪对比

比色皿 UV-Vis 分光光度计和吸光度微孔板读数仪都可测量透射光，但样品呈现和目标流程不同。分光光度计通常提供受控比色皿光程及灵活扫描或附件；读数仪以低体积测量大量孔，并可按配置增加孵育、振荡、加样、自动化、荧光或发光。

选择应由测定、证据、样品体积、通量、光学几何和运行控制决定，而不只是样品数量。

先明确比较哪种读数仪

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“微孔板读数仪”涵盖：

  • 使用滤光片或单色器的仅吸光度读数仪。
  • 可进行吸光度光谱扫描的微孔板分光光度计。
  • 把吸光度与荧光、发光、时间分辨荧光等模式结合的多模式读数仪。
  • 针对 ELISA 或微生物生长等测定优化的专用系统。

Thermo Fisher Scientific 当前微孔板读数仪概述 🔗展示了这一范围。只能比较拟议配置实际包含的模式和附件。

测量流程比较

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因素比色皿 UV-Vis 分光光度计微孔板读数仪
主要格式一个或多个比色皿、流通池、探头或固体样品附件多孔板；部分型号还支持微量板或比色皿端口
光程所选比色皿通常固定且已知除非系统和方法适当校正，否则取决于孔几何和液面高度
体积从标准比色皿到专用微量池每孔低体积，整板合计
通量串行测量；换池器或吸样器可自动处理批次通过板式操作快速依次测量大量孔
光谱工作通常适合灵活扫描和附件式方法开发基于单色器的吸光度型号可扫描；滤光片型号可能只用固定波长
测定环境灵活样品架、温控、搅拌、流通和参比选项按型号提供板振荡、孵育、加样、顶部/底部光学、气体控制或自动化
其他检测模式通常为仪器光学范围内的吸光度/透射率多模式系统可增加荧光和发光，这是不同测量原理

光程是吸光度的核心差异

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标准比色皿通常有确定的 10 mm 光程。微孔板中，光程随样品体积、孔形、弯月面和板尺寸变化，因此原始板吸光度与 10 mm 比色皿结果可能不能直接比较。

部分仪器和方法用参比测量或确定几何，把微孔板结果估算或校正为 10 mm 等效光程。校正带有假设，必须针对样品、溶剂、温度、板和仪器核查。Thermo Fisher Scientific 蛋白质浓度格式技术说明 🔗展示了比色皿、微孔板、微量板和平台系统的代表性光程差异。

不要把软件归一化结果自动视为与已验证比色皿方法等效。按要求记录原始与校正计算，并用代表性标准品和样品测试转移。

比色皿分光光度计适合时

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  • 确定光程是方法核心。
  • 完整光谱扫描、灵活波长或基线调查很重要。
  • 流程使用专用比色皿、长短光程、流通池、光纤、积分球、搅拌或受控参比。
  • 样品容器、体积、温度或光学几何不一。
  • 通量适中，或换池器与吸样器满足批量需求。

材料、光程、体积和样品架匹配见 UV-Vis 比色皿与样品格式选择。

微孔板读数仪适合时

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  • 大量样品、标准品、对照和重复采用同一板式测定。
  • 每次较低体积能显著减少样品或试剂。
  • 板孵育、振荡、定时读数、加样或自动化属于测定。
  • 除吸光度外还需要荧光或发光。
  • 板布局、对照孔和数据缩减能一致管理。

较高标称通量不会取消板制备、移液、孵育、边缘效应、审核或重复。完整周期决定有效通量。

微孔板选择属于方法

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确认板材料、孔数、几何、底部设计、光学质量、波长透射、工作体积、密封、温度行为和仪器兼容性。吸光度用透明板未必适合荧光或发光；为后两者设计的黑板或白板会改变光学行为。UV 吸光度需要在目标波长适当透射的板。

孔体积和弯月面影响光程。小体积时，移液准确度和混合在结果中所占比例更大。气泡、冷凝、指纹、划痕和颗粒都会干扰光学读数。

吸光度、荧光、发光与浊度不可互换

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多模式不代表无需重新设计测定即可互换测量模式。吸光度测量透射光损失；荧光测量激发后的发射光；发光测量反应产生的光。它们各用不同试剂、对照、范围、干扰和设置。

浊度测量包含光散射，没有合适模型时不能解释为分子吸收。Thermo Fisher Scientific 吸光度与浊度说明 🔗区分两者，并警示不要把吸光度规格直接用于散射测定。

方法转移需要实验

Section titled “方法转移需要实验”

比色皿与板格式之间转移时评估：

  1. 光程及任何校正方法。
  2. 样品与试剂体积、浓度、混合和反应动力学。
  3. 板材料、孔几何、温度、蒸发和边缘效应。
  4. 测量波长或带宽、光学几何、扫描或读数时间及仪器线性。
  5. 空白、标准品、对照、重复、布局和接受标准。
  6. 移液、振荡、孵育、计时、残留和数据处理差异。
  7. 用代表性样品比较预定范围。

一个浓度成功不能证明整个测定范围等效。受监管或受控方法应采用实验室的变更控制和验证方式。

采购检查表

Section titled “采购检查表”
  • 当前及支持周期内可能需要的检测模式。
  • 波长选择、扫描、带宽、读数速度和光学几何。
  • 板格式、比色皿或微量选项及支持体积。
  • 振荡、孵育、加样、气体控制和自动化。
  • 光程校正与原始数据访问。
  • 测定软件、计算、板图、用户控制、审核、导出和审计要求。
  • 核查工具、培训、维护、服务和受支持软件环境。
  • 用代表性板、标准品、对照和样品演示。

相关指南

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参考资料

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