UV-Vis 比色皿与样品格式选择
UV-Vis 分光光度计测量置于光路中的样品，因此比色皿材料、光程、装液体积、窗口质量、方向、溶剂兼容性、温度、气泡和清洁度都会改变结果。样品架属于方法的一部分，不是选定仪器后才考虑的中性容器。
从测量与样品出发
Section titled “从测量与样品出发”记录：
- 测量波长或扫描范围。
- 预期吸光度和浓度范围。
- 可用样品体积及能否回收。
- 溶剂、pH、温度、挥发性和化学兼容性。
- 是否需要动力学、搅拌、流通、密封处理、多池或自动化。
- 所需空白、参比、光程控制和核查。
随后依据仪器文档确认比色皿和样品架。比色皿即使能放入样品室，仍可能使样品低于光束、在测量波长吸收或与样品反应。
使池材料匹配波长与化学性质
Section titled “使池材料匹配波长与化学性质”| 材料类别 | 典型用途 | 主要检查 |
|---|---|---|
| UV 级石英或熔融石英 | 需要宽光学透射范围的 UV 和可见测量 | 等级与透射范围、相关时的荧光背景、化学兼容性、窗口质量及清洁或更换成本 |
| 光学玻璃 | 可接受较短波长截止的可见区工作 | 实际透射范围、溶剂兼容性及方法是否会进入 UV 区域 |
| 一次性塑料 | 常规可见或指定 UV 兼容测定、更高通量或减少清洁 | 聚合物特定波长范围、批次一致性、耐溶剂和耐温性、划痕、成型差异和一次性操作 |
仅有材料名称并不足够。不同塑料配方的透射和溶剂限制不同，不同石英等级覆盖的波长区域也不同。Agilent UV-Vis 基础指南 🔗说明池窗透射范围必须覆盖方法波长，并区分石英、光学玻璃和聚苯乙烯范围。应使用准确比色皿的当前规格。
光程决定光学尺度
Section titled “光程决定光学尺度”在适用 Beer–Lambert 条件下，吸光度与浓度和光程成正比。标准矩形比色皿通常采用 10 mm 光程，但较短和较长光程可服务于不同范围。
- 较短光程可降低高浓度样品或高背景溶剂的吸光度。
- 方法和仪器仍适用时，较长光程可提高稀样品吸光度。
- 微量池可在保持确定光程的同时减少体积，但光束几何和装液必须正确。
- 开放式微量平台可能自动选择短光程，并需要自身的表面、清洁度、均匀性和光程控制。
改变光程会改变实测吸光度，可能需要调整计算、范围、空白和验证。不能假定软件会把所有格式归一化为 10 mm；应记录报告的是原始结果还是光程校正结果。
体积与光束高度都要匹配
Section titled “体积与光束高度都要匹配”比色皿标称容量不是最小可用体积。液面必须留有足够余量并完全覆盖光束。半微量和亚微量池通过缩小内部宽度或遮蔽侧壁，使较小体积处于正确光学区域。
确认：
- 仪器光束高度或 z 高度下的最小装液体积。
- 光学窗口尺寸和方向。
- 样品架是否遮蔽小孔径周围的杂散光。
- 弯月面、蒸发、气泡或悬浮物是否会穿过光束。
- 所选体积下移液和混合能否重复。
Agilent 亚微量池文档 🔗显示，减小体积、光程、z 高度和仪器兼容性是不同规格。
为流程选择格式
Section titled “为流程选择格式”| 格式 | 适用情况 | 需要控制的方法风险 |
|---|---|---|
| 标准可重复使用比色皿 | 灵活的单样品、扫描、参比或方法开发工作 | 清洁、残留、划痕、方向、配对和人员操作 |
| 一次性比色皿 | 清洁负担或交叉污染重要的常规批次 | 波长截止、溶剂和温度限制、批次或成型差异及废弃物 |
| 半微量或亚微量池 | 样品有限但希望保留常规比色皿光路 | 光束对准、装液高度、气泡、清洗和更高表面积体积比效应 |
| 短光程或长光程池 | 10 mm 下预期吸光度超出实用范围 | 样品架兼容性、计算、杂散光、浓度误差和方法转移 |
| 流通池或吸样器 | 重复、远程或连接过程的采样 | 管路体积、气泡、残留、清洁、流动稳定性和光程核查 |
| 恒温或搅拌池 | 动力学、平衡或温度依赖测量 | 实际样品温度、平衡、冷凝、搅拌几何和计时 |
| 微孔板 | 并行处理大量样品或小体积 | 可变光程、孔几何、弯月面、边缘效应、板材料、密封和读数仪光学 |
| 开放式微量平台 | 体积很小且适合生命科学测量 | 样品均匀性、表面污染、蒸发、短光程和确认范围 |
决策在逐个比色皿测量与微孔板测定之间时，参见分光光度计与微孔板读数仪对比。
比色皿操作属于测量控制
Section titled “比色皿操作属于测量控制”光学窗口应清洁、无划痕并始终保持一致方向。指纹、液滴、冷凝、绒屑、残留和气泡会改变透射或引起散射。使用与比色皿和样品兼容的清洁材料和程序；强溶剂或磨损会损坏比色皿。
配对池可帮助部分样品/参比流程，但不能取消检查、一致定向和合适空白。可重复使用比色皿会随污染和磨损而变化；一次性比色皿减少清洁，但仍需评估光学一致性和化学兼容性。
空白、散射与样品行为
Section titled “空白、散射与样品行为”空白应按方法定义，在不含分析物的情况下代表溶剂、试剂、容器和相关制备带来的光学贡献。不合适空白会造成假基线或浓度偏差。
浑浊、颗粒、乳液、沉淀和气泡会散射光。常规吸光度结果此时可能包含并非分子吸收造成的透射光损失。可考虑澄清、稀释、替代几何或其他技术，但应遵循方法，避免无意去除分析物或改变平衡。只有样品制备程序支持时，离心机才适用。
样品格式检查表
Section titled “样品格式检查表”- 波长范围和材料透射。
- 预期吸光度、浓度和所选光程。
- 最小与可用体积、光束高度、孔径和样品架。
- 溶剂、pH、温度、耐化学性和封闭方式。
- 空白、方向、配对、清洁、残留和检查。
- 混合、气泡、蒸发、散射和样品稳定性。
- 通量、自动化、回收、废弃物和操作步骤。
- 计算、光程校正、核查和转移要求。