Espectrofotómetro UV-Vis

Un espectrofotómetro mide cómo interactúa una muestra con la luz. Esta guía se limita a los espectrofotómetros ultravioleta-visible (UV-Vis), que suelen medir la luz transmitida y expresar el resultado como absorbancia o transmitancia a una longitud de onda o en un espectro. No abarca los espectrofotómetros infrarrojos, de fluorescencia, absorción atómica u otras familias.

Para qué sirve un espectrofotómetro

Las mediciones UV-Vis se utilizan a menudo para estimar concentraciones, registrar espectros, seguir reacciones y realizar controles rutinarios cuando el analito o un reactivo adecuado absorben en la región medida. En condiciones apropiadas, la absorbancia puede relacionarse con la concentración y la longitud del trayecto óptico mediante la ley de Beer-Lambert. La descripción de UV-Vis de Agilent 🔗 explica el trayecto de medición básico y sus limitaciones habituales.

Componentes principales

Componente	Función en el proceso
Fuente de luz	Proporciona luz en el intervalo de longitudes de onda previsto.
Selector de longitud de onda	Utiliza un monocromador o filtro para seleccionar la longitud de onda.
Portamuestras	Coloca una cubeta, microplaca, muestra sólida o accesorio.
Detector	Mide la luz transmitida o reflejada.
Sistema de datos	Convierte la señal óptica en absorbancia, transmitancia o un espectro.

Dónde encaja

La espectrofotometría es directa y accesible cuando la muestra y la pregunta analítica se ajustan a una medición óptica. Es menos selectiva cuando varios componentes absorben a longitudes de onda similares o cuando la turbidez, la dispersión, una transparencia insuficiente del disolvente o una absorción débil complican el resultado. En esos casos, una separación por HPLC o LC-MS puede ser más adecuada. La guía de selección de detectores HPLC explica la diferencia entre la detección UV en flujo y una medición espectrofotométrica directa.

Contexto de los fabricantes

En un proceso UV-Vis, la adecuación también incluye el portamuestras o accesorio, el proceso de datos y el enfoque de verificación y soporte. La guía de líneas de productos UV-Vis sitúa familias actuales representativas de Agilent, Shimadzu, Thermo Fisher Scientific y PerkinElmer según el formato de muestra y el fin de medición. Consulte Agilent, Shimadzu y Thermo Fisher Scientific para el contexto entre categorías.

Como el portamuestras define el trayecto óptico, Selección de cubetas y formatos de muestra UV-Vis abarca material, longitud de trayecto, volumen, geometría y manipulación. Si el proceso puede pasar de cubetas en serie a ensayos en placa, Espectrofotómetro frente a lector de microplacas compara trayecto óptico, capacidad de procesamiento, controles y modos de detección.

Aspectos que considerar antes de la adopción

Objetivo de medición: Determine si necesita una lectura a una longitud de onda, un barrido, cinética, cálculo de concentración o un proceso en placas.
Comportamiento de la muestra: Compruebe absorbancia prevista, transparencia del disolvente, turbidez, intervalo de concentración y compatibilidad con el portamuestras.
Trayecto óptico y recipiente: El material, la longitud del trayecto, la limpieza, la orientación y el volumen de llenado de la cubeta pueden afectar el resultado.
Controles del método: Los blancos, materiales de referencia, patrones de calibración y criterios de aceptación deben formar parte del método.
Adecuación al proceso: La capacidad de procesamiento, el control de temperatura, los accesorios, el software y los informes pueden importar tanto como el intervalo de longitudes de onda.

Cuidado habitual, calibración y seguridad

Mantenga limpias las cubetas y superficies ópticas, utilice un blanco adecuado e investigue la deriva inesperada de la línea base o los cambios de las lecturas de referencia. La calibración o verificación debe definirse según las instrucciones del instrumento, el método y el sistema de calidad. Una descripción general no puede fijar límites de aceptación para un ensayo concreto.

Manipule muestras, reactivos, material de vidrio y fuentes UV según los procedimientos de seguridad. Cuando el protocolo exige clarificación o separación de fases, puede utilizarse una centrífuga antes de la medición óptica.

Antes de una compra o transferencia de método

Describa el formato de muestra, las longitudes de onda, la capacidad de procesamiento, el uso de cubetas o placas, la temperatura y las salidas de datos. Evalúe si el método necesita un instrumento de barrido, lecturas de longitud de onda fija, accesorios o una técnica más selectiva. No trate un amplio intervalo de longitudes de onda como sustituto de una comprobación específica. Use la guía de criterios de selección UV-Vis para elaborar una preselección.